在鋼瓶上面連接減壓閥（好用培養箱專用閥門），再用軟管連接到二氧化碳培養箱的CO2氣體進口，軟管兩端用專用卡子固定好，鋼瓶閥門開之前，確保減壓閥關閉。鋼瓶閥門打開之后，再開減壓閥的小閥門，調節好壓力，具體的要控制壓力要設置在合理的壓力范圍內。
二氧化碳培養箱一般使用的壓力都不會很高，培養箱都很嬌貴的，所以要先調好減壓閥出口的壓力后再連接二氧化碳培養箱。二氧化碳減壓閥裝在鋼瓶上面后，逆時針打開鋼瓶總開關，減壓閥右側表顯示鋼瓶內壓力，觀察高壓表讀數，記錄高壓瓶內中的二氧化碳壓力，壓力很低表示二氧化碳量少，需重新充入二氧化碳，壓力正常后，將減壓閥出廠配置的調節手輪插入減壓閥正面凸出凹洞處，順時針緩慢轉動減壓閥調節螺桿，使其壓縮主彈簧將活門打開，減壓閥左側表顯示出氣壓力，這樣進口的高壓氣體由高壓室經節流減壓后進入低壓室，并經出口通往CO2培養箱。一般情況下，二氧化碳培養箱需要的壓力在0.03Mpa – 0.06Mpa范圍內，也有用到0.1Mpa的，需要根據實際情況而定。
仔細檢查連接部位是否漏氣，將肥皂液涂到連接處進行檢查，如有氣泡則調節連接，確認不漏氣后進行實驗。
使用完后，先順時針關閉鋼瓶總開關，再逆時針旋松減壓閥。
注意事項
防止鋼瓶的使用溫度過高。鋼瓶應存放在陰涼、干燥、遠離熱源（如陽光、暖氣、爐火）處，不得超過31℃，以免液體CO2溫度的升高，體積膨脹而形成高壓氣體，產生爆炸危險。鋼瓶千萬不能臥放。如果鋼瓶臥放，打開減壓閥時，沖出的CO2液體迅速氣化，容易發生導氣管爆裂及大量CO2泄漏的意外。減壓閥、接頭及壓力調節器裝置正確連接且無泄漏，沒有損壞、狀況良好。CO2不得超量填充。液化CO2的填充量，溫帶氣候不要超過鋼瓶容積的75%，熱帶氣候不要超過7%。舊瓶定期接受安全檢驗。超過鋼瓶使用安全規范年限，接受壓力測試合格后，才能繼續使用。氣瓶放氣或開啟減壓閥時動作緩慢。如閥門開啟速度過快，減壓閥工作部分的氣體因受絕熱壓縮而溫度大大提高，這樣有可能使有機材料制成的零件如橡膠填料、橡膠薄膜纖維質襯墊著火燒壞，并可使減壓閥燒壞。另外，由于放氣過快產生的靜電火花以及減壓閥有油污等，也會引起著火燃燒燒壞減壓閥零件。減壓閥安裝前及開啟氣瓶閥時的注意事項：安裝減壓閥之前，要略打開氧氣瓶閥門，吹除污物，以防灰塵和水分帶入減壓閥。在開啟氣瓶閥時，瓶閥出氣口不得對準操作者或他人，以防高壓氣體突然沖出傷人。減壓閥出氣口與氣體橡膠管接頭處用退過火的鐵絲或卡箍擰緊；防止送氣后脫開發生危險。如長期不使用CO2時，應將CO2開關關閉，防止CO2調節器失靈。